1．I實(shí)驗(yàn)材料與儀器
(1)材料．原料為榮成市人工養(yǎng)殖廠的干海帶，D101大孔吸附樹脂(G藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)D72型犬孔強(qiáng)酸性苯乙烯系鼷離子交換樹脂、D315弱堿縫苯乙烯系陰褰子交換辮脂、D296大孔強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂(南開大學(xué)化工廠)，纖維索酶(150 000 U／g)、果膠酶(20 000 U／g)(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司)，考馬斯亮藍(lán)G-250(Fluka進(jìn)口分裝)，其它試劑均為G產(chǎn)分析純．(2)儀器與設(shè)備．高速組織搗攆撰l(DS-1蘩，上海標(biāo)本模型廠)，電熬逐瀑瘩洛鍶(◇K一98一l黧，金壇棗歪基儀器騫限公靄)，離心撬
(TDL一5一A型，上海安亭科學(xué)儀器廠)，
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE52～99型，
上海亞榮生化儀器廠)，循環(huán)水式多用真空泵(SHB-Ill型，鄭州長(zhǎng)城儀器廠)，真空冷凍干燥機(jī)(Flexi—dry systems，Stone Ridge。NewYork。made inUSA)，布氏灞斗，35 minx400 mm層斬柱，紫羚分光巍度計(jì)(3 300 RKD羹，索氏提取器)．
1．2 LPS的粗提取
(1)酶提法提取LPS．準(zhǔn)確稱取海帶，加入15倍的水，用高速組織搗碎機(jī)搗碎，依次加入纖維素酶0。25 g，果膠酶0。5 g，瀵勻，將pH籃漏**4．0，予40℃"-50℃水浴4 h，再升涅**80℃30 mim，使酶滅活，待冷卻后收集濾液，將濾渣水洗兩次合并濾液．所得濾液調(diào)pH值**7．0，經(jīng)減壓蒸餾濃縮**原體積的l／4～1／5，5 000 r／min離心15 min去除不溶性雜質(zhì)．上清液加無水乙醇**總體積的30％，靜置沉淀4 h，離心去除不溶物．上清液加無水乙醇**總體積的60％，低溫過夜沉淀多糖后離心，沉淀依次用無水乙醇、乙醚、丙酮洗數(shù)次，冷凍干燥得LPS粗品．(2)水提法提取LPS．準(zhǔn)確稱取海帶，加入20倍的水，用高速組織搗碎機(jī)搗碎．然后在70℃水浴中抽提4 h，其它步驟與酶解工藝相同．
1．3 LPS的初步純化
(1)CTAB沉淀硫酸化多糖．將酶解法所提LPS粗品用適量蒸餾水溶解，加入2％的CaCl：靜置2 h，5 000 r／rain離心15 min去除粗糖液中殘留的褐藻膠，上清液加5％十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)沉淀酸性硫酸多糖．沉淀用3％的KCl溶解后，用三倍體積的乙醇沉淀，5 000 r／min離心15 min，沉淀依次用無水乙醇、乙醚、丙酮洗數(shù)次，冷凍干燥．(2)大孔吸附樹脂脫色．取100 ml濃度為1％的粗多糖液加入1g處理過的樹脂，放人恒溫?fù)u床，丁=30℃、120 r／rain、10 h，脫色后多糖液經(jīng)雙層濾紙過濾后，測(cè)定色素吸光值及糖含量，計(jì)算實(shí)驗(yàn)前后的溶液的脫色率及多糖回收率Is3，并對(duì)所選樹脂脫色效果的因素進(jìn)行研究
1．4 LPS成分的測(cè)定
(1)多糖含量的測(cè)定．總糖含量測(cè)定采用蒽酮硫酸法[6]，還原糖含量測(cè)定采用3，5一二硝基水楊酸(DNS)比色法[7]，均用葡萄糖作為對(duì)照品做標(biāo)準(zhǔn)曲線．
(2)蛋白質(zhì)含量的測(cè)定．采用考馬斯亮蘭比色法[8]，以牛血清白蛋白做標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線．
(3)硫酸根含量測(cè)定．采用比濁法[9]，以硫酸鈉做標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線．
